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pLL3.7-Hsa-Let-7a-1miRNA人源基因调控质粒
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pLL3.7-Hsa-Let-7a-1miRNA人源基因调控质粒
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基本信息
产品名称:
pLL3.7-Hsa-Let-7a-1miRNA人源基因调控质粒
产品编号:
P1036
规格:
10μl质粒/300μl菌液
启动子:
mouse U6 promoter
复制子:
pUC ori,F1 ori,SV40 ori
终止子:
WPRE
质粒分类:
RNA文库质粒;RNA人源质粒;miRNA人源质粒
质粒大小:
8994bp
原核抗性:
Amp(100μg/ml)
筛选标记:
EGFP,Puro
克隆菌株:
Stbl3
培养条件:
37℃,LB,有氧
表达宿主:
293T等哺乳细胞
诱导方式:
无需诱导
5测序引物:
mU6-F(CAGCACAAAAGGAAACTCACC)
3测序引物:
SV40-R(GGACTTTCCACACCTGGTTG)
质粒简介:
pLL3.7-Hsa-Let-7a-1miRNA质粒是在pLL3.7载体上克隆了一段非编码核苷酸序列得到的一个哺乳细胞慢病毒miRNA(MicroRNA)表达质粒。mU6启动Hsa-Let-7a-1miRNA的转录。该质粒可作为普通过表达质粒直接转染哺乳细胞,其是第三代慢病毒载体,所以也可包装成慢病毒侵染细胞。质粒本身同时带有EGFP荧光标签和Puro抗性标记,可利用EGFP来检测转染效率,或可用流式细胞仪和嘌呤霉素筛选转染后的细胞得到阳性克隆。
质粒图谱:
质粒序列:
点击查看序列
LOCUS Exported 8994 bp ds-DNA circular SYN 09-七月-2017
DEFINITION .
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pLL3.7-Hsa-Let-7a-1miRNA
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 8994)
AUTHORS XC
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported 2017年7月9日 from MiaoLingPlasmid
http://www.snapgene.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..8994
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 238..617
/note="CMV enhancer"
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 619..817
/note="CMV promoter"
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
LTR 835..1015
/note="5' LTR (truncated)"
/note="truncated 5' long terminal repeat (LTR) from HIV-1"
misc_feature 1062..1187
/note="HIV-1 Psi"
/note="packaging signal of human immunodeficiency virus
type 1"
misc_feature 1686..1919
/note="RRE"
/note="The Rev response element (RRE) of HIV-1 allows for
Rev-dependent mRNA export from the nucleus to the
cytoplasm."
misc_feature 2446..2563
/note="cPPT/CTS"
/note="central polypurine tract and central termination
sequence of HIV-1"
promoter 2622..2933
/note="mU6 promoter"
/note="mouse U6 promoter"
misc_feature 2949..2955
/note="Xho-SalI拼接点"
misc_feature 2956..3304
/note="pri-hsa-miR-let-7a-1"
misc_feature 3103..3182
/note="pre-hsa-let-7a-1"
misc_feature 3103..3182
/note="pre-hsa-let-7a-1"
promoter 3343..3672
/note="SV40 promoter"
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 3523..3658
/note="SV40 ori"
/note="SV40 origin of replication"
CDS 3688..4287
/codon_start=1
/gene="pac from Streptomyces alboniger"
/product="puromycin N-acetyltransferase"
/note="PuroR"
/note="confers resistance to puromycin"
/translation="MTEYKPTVRLATRDDVPRAVRTLAAAFADYPATRHTVDPDRHIER
VTELQELFLTRVGLDIGKVWVADDGAAVAVWTTPESVEAGAVFAEIGPRMAELSGSRLA
AQQQMEGLLAPHRPKEPAWFLATVGVSPDHQGKGLGSAVVLPGVEAAERAGVPAFLETS
APRNLPFYERLGFTVTADVEVPEGPRTWCMTRKPGA"
primer_bind 4296..4312
/note="KS primer"
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
protein_bind 4354..4387
/bound_moiety="Cre recombinase"
/note="loxP"
/note="Cre-mediated recombination occurs in the 8-bp core
sequence (GCATACAT)."
enhancer 4503..4806
/note="CMV enhancer"
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 4807..5010
/note="CMV promoter"
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
CDS 5055..5774
/codon_start=1
/product="enhanced GFP"
/note="EGFP"
/note="mammalian codon-optimized"
/translation="MVSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTL
KFICTTGKLPVPWPTLVTTLTYGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDD
GNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIK
VNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLL
EFVTAAGITLGMDELYK"
protein_bind 5794..5827
/bound_moiety="Cre recombinase"
/note="loxP"
/note="Cre-mediated recombination occurs in the 8-bp core
sequence (GCATACAT)."
misc_feature 5883..6471
/note="WPRE"
/note="woodchuck hepatitis virus posttranscriptional
regulatory element"
CDS complement(6354..6365)
/codon_start=1
/product="Factor Xa recognition and cleavage site"
/note="Factor Xa site"
/translation="IEGR"
primer_bind complement(6474..6490)
/note="KS primer"
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
LTR 7000..7180
/note="5' LTR (truncated)"
/note="truncated 5' long terminal repeat (LTR) from HIV-1"
rep_origin complement(7242..7830)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(8001..8861)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(8862..8966)
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
ORIGIN
1 gtcgacggat cgggagatct cccgatcccc tatggtgcac tctcagtaca atctgctctg
61 atgccgcata gttaagccag tatctgctcc ctgcttgtgt gttggaggtc gctgagtagt
121 gcgcgagcaa aatttaagct acaacaaggc aaggcttgac cgacaattgc atgaagaatc
181 tgcttagggt taggcgtttt gcgctgcttc gcgatgtacg ggccagatat acgcgttgac
241 attgattatt gactagttat taatagtaat caattacggg gtcattagtt catagcccat
301 atatggagtt ccgcgttaca taacttacgg taaatggccc gcctggctga ccgcccaacg
361 acccccgccc attgacgtca ataatgacgt atgttcccat agtaacgcca atagggactt
421 tccattgacg tcaatgggtg gagtatttac ggtaaactgc ccacttggca gtacatcaag
481 tgtatcatat gccaagtacg ccccctattg acgtcaatga cggtaaatgg cccgcctggc
541 attatgccca gtacatgacc ttatgggact ttcctacttg gcagtacatc tacgtattag
601 tcatcgctat taccatggtg atgcggtttt ggcagtacat caatgggcgt ggatagcggt
661 ttgactcacg gggatttcca agtctccacc ccattgacgt caatgggagt ttgttttggc
721 accaaaatca acgggacttt ccaaaatgtc gtaacaactc cgccccattg acgcaaatgg
781 gcggtaggcg tgtacggtgg gaggtctata taagcagcgc gttttgcctg tactgggtct
841 ctctggttag accagatctg agcctgggag ctctctggct aactagggaa cccactgctt
901 aagcctcaat aaagcttgcc ttgagtgctt caagtagtgt gtgcccgtct gttgtgtgac
961 tctggtaact agagatccct cagacccttt tagtcagtgt ggaaaatctc tagcagtggc
1021 gcccgaacag ggacttgaaa gcgaaaggga aaccagagga gctctctcga cgcaggactc
1081 ggcttgctga agcgcgcacg gcaagaggcg aggggcggcg actggtgagt acgccaaaaa
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