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pGRE-luc单荧光素酶信号通路活性质粒
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基本信息
产品名称:
pGRE-luc单荧光素酶信号通路活性质粒
产品编号:
P1743
规格:
10μl质粒/300μl菌液
复制子:
pUC
原核抗性:
氨苄青霉素Amp
筛选标记:
荧光素酶Luc
克隆菌株:
大肠杆菌DH5α
培养条件:
37℃
质粒简介:
载体 pGRE-Luc 可以用来检测 GRE 信号通路活性。载体 pGRE-Luc 含有萤火虫来源的荧光 素酶基因。这个载体也包含多拷贝的 GRE 结合位点序列,并且该序列和一段 TATA-类似启 动子(PTAL)融合在一起,PTAL 源于单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)启动子。当内源性 的 GRE 蛋白结合到 GRE 增强元件时,转录起始,报告基因开始表达。 荧光素酶编码序列后有一段 SV40 多聚腺苷酸信号以确保在真核细胞中能正确有效的转录。 在 GRE 结合位点的上游有一段合成的转录抑制区(TB),该区域由多聚腺苷酸信号与转录 终止位点组成,以减少转录背景。该载体骨架也包含了一个 f1 复制起始区域以便进行单链 DNA 的复制,一个 pUC 复制起始位点以及一个氨苄抗性基因,便于进行培养筛选。
载体 pGRE-Luc 用来检测转录因子 GRE 与 GRE 增强子的作用,提供了直接检测这条通路活 性的途径。该载体可以和一个目的基因的表达载体共转来观察,其是否影响这条通路的活性。 荧光素酶是一种高敏感性的酶原性报告蛋白,适用于任何一种标准的荧光素酶检测法,可以 用来定量表达水平。pGRE-Luc 载体可以用任何一种标准的方法转染至哺乳动物细胞。为了 筛选稳定克隆,转染的载体通常含有抗性筛选基因如:neomycin,hygromycin 或者 puromycin。
合适的宿主系:DH5α 以及一些其他通用系。进行单链 DNA 的合成宿主菌需要包含一个 F’ episome,比如 JM109。 筛选标记:质粒为宿主 E.coli 提供了氨苄抗性(100ug/ml) E.coli 复制起始位点:pUC 拷贝数:~500 不相容质粒:pMB1/ColE1。
质粒图谱:
质粒序列:
点击查看序列
以下为测序所得的部分序列
ORIGIN
1 gaattgttca ggaccagggc gtatctcttc atagccttat gcagttgctc tccagcggtt
61 ccatcttcca gcggatagaa tggcgccggg cctttcttta tgtttttggc gtcttccatg
121 gtggctttac caacagtacc ggaatgccaa gcttctgctt catccccgtg gcccgttgct
181 cgcgtttgct ggcggtgtcc ccggaagaaa tatatttgca tgtctttagt tctatgatga
241 cacaaacccc gcccagcgtc ttgtcattgg cgaattcgaa cacgcagatg cagtcggggc
301 ggcagatcta gaacaaaatg taccggtaca ttttgttcta gaacaaaatg taccgctagc
361 acgcgtaaga gctcggtacc tatcgataga gaaatgttct ggcacctgca cttgcactgg
421 ggacagccta ttttgctagt ttgttttgtt tcgttttgtt ttgatggaga gcgtatgtta
481 gtactatcga ttcacacaaa aaaccaacac acagatgtaa tgaaaataaa gatattttat
541 tgcggccgct ccaagtacct cccgtacctt aatattactt acttatcatg gtagcttggg
601 ctggcgtaat agcgaagagg cccgcaccga tcgcccttcc caacagttgc gcagcctgaa
661 tggcgaatgg caaattgtaa gcgttaatat tttgttaaaa ttcgcgttaa atttttgtta
721 aatcagctca ttttttaacc aataggccga aatcggcaaa atcccttata aatcaaaaga
781 atagaccgag atagggttga gtgttgttcc agtttggaac aagagtccac tattaaagaa
841 cgtggactcc aacgtcaaag ggcgaaaaac cgtctatcag ggcgatggcc cactacgtga
901 accatcaccc taatcaagtt ttttggggtc gaggtgccgt aaagcactaa atc
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